Détecteur UV dwd - 1 (haute performance double faisceau double longueur d'onde) Traitement de données intégré

Gamme de longueurs d'onde: 254 nm, 280 nm (détection simultanée), et éventuellement deux longueurs d'onde détectées simultanément entre les raies 254 nm, 280 nm - 400 nm.

* caractéristiques de l'instrument dwd - 1

Protéines 280nm / 254nm double longueur d'onde détermination:

Acides aminés aromatiques tels que la tyrosine, le tryptophane, qui contiennent des doubles liaisons conjuguées dans les molécules de protéines. Ils ont la propriété d'absorber la lumière ultraviolette, dont le pic d'absorption est à la longueur d'onde de 280 nm, et la valeur de densité optique du pic d'absorption dans cette longueur d'onde est proportionnelle à sa concentration, ce qui peut être utilisé comme base pour la détermination qualitative et quantitative des protéines, c'est Pourquoi la méthode d'absorption ultraviolette à 280 nm est généralement utilisée pour la surveillance continue de la concentration de protéines dans les systèmes de chromatographie. Mais en raison de la teneur différente en tyrosine et en tryptophane de diverses protéines, pour une quantification précise, il est nécessaire de comparer la protéine pure à tester en tant que norme ou de connaître son coefficient d'extinction en tant que référence. En outre, de nombreuses substances non protéiques ont également une capacité d'absorption constante à la longueur d'onde de 280 nm, qui peut interférer. Parmi eux, les effets sont plus graves, en particulier les acides nucléiques (purines et pyrimidines). L'absorption à 280 nm est 10 fois plus forte (par gramme) que celle des protéines, mais l'absorption des acides nucléiques est plus forte à 254 nm, avec un pic d'absorption autour de 254 nm. Le coefficient d'extinction à 254 nm pour les acides nucléiques est 2 fois supérieur à 280 nm,

Alors que la protéine est l'inverse, la valeur d'absorption UV de 280 nm est supérieure à la valeur d'absorption de 254 nm.

HabituellementPour:

Rapport d'absorption de la lumière pour les protéines pures: A280 / a254 "1,8

Rapport d'absorption de la lumière pour les acides nucléiques purs: A280 / a254 0,5

Par conséquent, lorsque des acides nucléiques sont présents simultanément dans la solution protéique (la plupart du temps dans les systèmes biologiques), od254 nm doit être déterminé simultanément, avec od280 nm. Le contenu réel en protéines est ensuite extrapolé à partir du rapport des absorbances des deux longueurs d'onde, corrigé par une formule empirique pour éliminer l'influence des acides nucléiques.

Concentration en protéines = 1,45 × A280 - 0,74 × a254 (mg / ML)

Cette formule empirique a été établie à partir d'une série de données déterminées à partir d'un mélange de protéines (enzymes énolases de levure) et d'acides nucléiques (acides nucléiques de levure) dans des proportions de concentration différentes connues.